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检测Th1细胞和Th2细胞
发布时间:2019-10-09 点击:
首先,检测试剂1。
PMA原液:PMA溶解于DMSO中,在零浓度。
在这种情况下,在100的/毫升1微克/毫升的工作浓度25纳克,RPMI-1640或PBS(无菌的,叠氮化钠):商店1毫克/毫升,-20℃,和溶液1有可能稀释每25μg的作品稀释母液1毫升。
2
依诺霉素原液:溶于DMSO为1mg /离子霉素ml的浓度,在20℃。?。工作溶液:储备溶液稀释1:20 RPMI-1640或PBS(无菌的,叠氮化钠)在中间,此时,工作浓度,以1毫克/毫升,可以在溶液中稀释,50预留会有20μg的以微克/毫升/毫升。
3
莫能菌素:储备溶液:溶于在50毫克/毫升的甲醇溶液Menensuta的浓度。它可以在40置于水浴?43℃推广已得到解决。
只有4个月,在4℃保存。工作溶液:RPMI-1640或PBS(无菌的,无叠氮化钠)稀释在1毫克/毫升1:50。工作的集中度为1。
7微克/毫升(以17μl/ ml)中。
4
RPMI?1640,RPMI?1640含10%FCS(胎牛血清),2毫摩尔/ L谷氨酰胺,50微克/ ml青霉素,50微克/ ml链霉素和100微克/ ml新霉素。
抗体:细胞表面标记抗体。CD3-PC5(PerCP),CD8-FITC。
胞内因子:IL-4-PE,如IFN-Y。
阻滞剂:可从美国Caltag公司公司作为FixPerm断路器。EE的BD公司FACS断路器。UU。,Immunotech公司的法国IntraPrep。
其次,检测步骤1。
用肝素抗凝和抽完血
2
两个管被用作阴性对照管(管A)和测量管(管B)中,并加入IPRM1?的血液1640和100μL100μL的在两个管。
3
3加入到管A.
其中加入4微升/毫升Moengxing工作流体,管B的:5微升/毫升的工作流体PMA +4μL/ 150微克/ ml的伊屋诺霉素的工作流体3的。
4ul1mg / ml的Moengxing液压流体。
4
37℃下,在5%CO 2培养箱中4?6小时孵育。

拌匀除去100 IU,CD3-PC5(PerCP)的适当量,CD8-FITC是为时间的温育预定的时间内加入(参见抗??体说明书)。
6
固定和阻塞在断路器。
7
其中加入IL-4-PE的适当量Δθ,IFN-γPE,并温育一段时间(参见抗体说明书)。
8
用PBS洗涤一次,除去上清液,并再悬浮于PBS适量细胞沉淀,并在机器中进行测试。
三,分析结果1。
T淋巴细胞是通过将CD3门上的选择。
2
在第一步骤中识别出的淋巴细胞通过建立的两个参数分别与CD8和IFN-γ,直方图进行分析。
3
CD8 / IFN-γ+细胞(Th1)和CD8 - / IL - 4 +(Th2)时,得到的细胞的百分比。